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Western blot有多种类型的膜可以用，不是所有类型的膜都适合做Stripping。 PVDF膜是最适合做Stripping的膜类型，蛋白样本的丢失量最小。 western转膜之后，封闭之前不需要洗膜，直接放在封闭液里即可。 封闭后也不需要洗膜，直接加入一抗孵育。 如果需要染色检测胶中蛋白，可以在转膜前或转膜后用丽春红染色工作液进行染色，并用大量的水洗膜直至水变清无色。 抗体清除液是什么?Western抗体清除液又称为一二抗清除液或膜再生液（stripping buffer），常用于WB中转移了蛋白的膜的重复利用。
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A．用TBST一直洗膜，洗8hrs以上就可以清除多数蛋白的信号，信号过强的蛋白如内参除外。 所以，当你的抗体非常弱的时候，孵育过夜实际上相当于stripping，新的信号不会出现，原来的信号也会被漂洗干净，出现白板。 a.加入适量蒸馏水装有NC膜或 PVDF膜 的抗体孵育盒中，漂洗5min（液体量能没过膜即可） b.弃掉蒸馏水加入适量抗体洗脱液，摇床上漂洗5min； 将膜放入剥离液中，浸泡30分钟，期间可轻轻晃动容器2 - 3次，以加速抗体的剥离过程。 剥离完成后，用TBST进行清洗，每次清洗3 - 5分钟，共清洗3次，以去除残留的剥离液和抗体。
小编推荐使用配方三，优点是可以常温使用，并且适用于NC和PVDF膜。 根据小编经验，配方三比较温和，亲测一张膜可以反复剥离和敷抗体三次没问题。
WB洗膜是去除非特异性结合，增加表达的特异性，而tbs和tbst都可以用来洗膜，但是tbst中的t是tween20，是离子去污剂。 推荐先整膜转封闭完之后再裁膜，可以有效避免把胶切得稀碎，胶是脆的，膜是软的，所以建议切膜不切胶。 整膜封闭还有一个好处是比较节约封闭液。 对于贴壁细胞： 4℃ 预冷的 PBS 洗 2~3 遍，用细胞刮子刮下细胞，或用胰蛋白酶处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。
